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    豬繁殖與呼吸綜合征病毒的解讀
    http://www.dzyan360.cn | 時間:2012-11-19 09:56:28 | 關注人次[] | 字體設置:

    1 豬繁殖與呼吸綜合征病毒

      豬繁殖與呼吸綜合征病毒【PRRSV】現在流行于美國、加拿大、歐洲和亞洲。但科學家懷疑該病毒在世界各地均有分布。世界其它地區的診斷學家不斷發展該病的診斷技術,檢測病毒將變得更為容易,也將印證我們的懷疑。養豬從業者可以從確診PRRS的過程中了解該病。該病的臨床癥狀復雜,可感染呼吸系統和生殖系統,并且易感豬的豬齡范圍廣泛,因此在遇到臨床癥狀多樣的疾病時,PRRS是值得懷疑的對象。

      20世紀80年代中晚期,易感豬感染PRRS能夠引發較為一致的臨床癥狀。許多感染PRRS的豬群同時發生繁殖障礙和呼吸道疾病,且繁殖障礙更為嚴重。母豬表現以下典型癥狀:中度發熱【104到106華氏度】,短時間的食欲減退,早產【108-110天】導致死胎數明顯增加,隨后出現妊娠早期母豬流產,木乃伊胎增多。出生的活仔中很多較弱,幾小時內死亡;存活下來的仔豬生長緩慢,易發細菌病,最終死亡,通常很難控制。這些細菌病中包括鏈球菌病、鼻炎和格氏病【副豬嗜血桿菌】等等。通常,斷奶前和斷奶后豬出現嚴重的呼吸道疾病,表現為急促的腹式呼吸,多稱為“呼吸困難”。PRRSV在肺內增殖引起間質性肺炎,但其他病毒也可引起類似病變,因此發現間質性肺炎提示可能存在PRRSV感染,但不等同于確診為PRRS。

      PRRS在豬群中漸漸“成熟”,其臨床癥狀也隨之發生改變。前面描述同時存在繁殖障礙和呼吸道癥狀的經典PRRS仍有發生。但更為常見的是只出現繁殖障礙或呼吸道癥狀。并且現在發生時呼吸道癥狀比繁殖障礙明顯。

      保育豬和生長育肥豬出現呼吸道問題,尤其是抗生素治療效果不明顯時,PRRS可疑。即使已知這種呼吸道疾病的病原為胸膜肺炎放線桿菌或豬霍亂沙門氏菌,但PRRS感染也可能在其中發揮啟動或加重病情的作用。

      2 血清學診斷

      現有的檢測PRRSV特異性抗體的方法包括間接熒光抗體檢測【IFA】、血清病毒中和試驗【SVN】、免疫過氧化物酶單層試驗【IPMA】和酶聯免疫吸附試驗【ELISA】。其中,IFA,SVN和ELISA檢測是現階段北美獸醫診斷實驗室采用的檢測方法。

      IFA具有高度的特異性【99.5%】,但不同動物個體的敏感性不確定。與ELISA相比,IFA的優勢在于能夠確定抗體滴度。根據試驗中血清的初始稀釋度,滴度為16或20視為陽性。然而由于結果為主觀判定,不同實驗室或檢測員進行檢測時IFA滴度終點會有差異。這也限制了IFA在小規模樣品檢測上的應用。此外,由于PRRSV抗原的多樣性,檢測所用的PRRSV毒株不同,檢測結果也會不同【陰性vs陽性,或滴度】。

      最近出現了檢測PRRSV特異性IgM抗體的IFA方法。這種方法可用于檢測急性/最近發生的PRRSV感染,滴度16或20為陽性。很有意思的是,研究表明IgM陽性樣品中81%的樣品可分離到病毒。然而,值得關注的是該方法存在由非特異性IgM引起的假陽性結果,因此該方法在廣泛用于常規診斷之前必須對其所有的實驗性能包括特異性和敏感性進行評估。

      ELISA的不同形式包括:采用樣品與陽性比值的間接ELISA,直接采用OD值的間接ELISA和阻斷ELISA。IDEXX ELISA試劑盒檢測樣品,S/P值等于或高于0.4時為陽性。據報道,該方法靈敏而特異,敏感性為100%,特異性為99.5%。

      盡管S/P值與IFA滴度間可能存在關聯,但生產商不推薦以這種方式來解讀S/P值。許多獸醫診斷學家和從業者認為S/P值為2.5或以上即表示最近發生或正在發生感染。自動化操作是該方法的一大優勢,因為自動操作差異小,且易于實現高水平的質量控制。此外,ELISA還有其他優點:a】歐洲株和美洲株PRRSV抗體均可檢測;b】 檢測周期短;c】 通過USDA和AgCanada認證。

      SVN檢測也是一種特異性檢測,但以前的試驗顯示SVN的敏感性低于IFA和ELISA方法。目前,滴度4視為陽性。最近的研究顯示被測血清中加入新鮮豬血清可提高SVN檢測的敏感性。即便如此,SVN方法也最好作為一種研究工具而非常規診斷手段來使用。
     3 血清學結果

      試驗感染PRRSV的豬,IFA,ELISA,SVN首次檢測到病毒特異性抗體IgG的時間分別為感染后7-11,9-13和9-28天,達到高峰的時間則為感染后30-50,30-50和60-90天。感染后5天內檢測到PRRSV特異性IgM抗體,并可維持到感染后21-28天。實驗和田間觀察顯示IFA, ELISA和SVN檢測抗體滴度通常分別在4-5個月,4-10個月和12個月時降至不可檢測水平。未接觸過該病原的豬接種疫苗后抗體也呈現相同的時間模式。

      基于Rollings Laboratory對30,000份血樣的檢測結果,我們得到以下關于PRRS的信息:

      1】 未免疫小母豬,后備公豬和成年種豬的S/P值<2.25【測定值與陽性對照測定值的比值】,顯示在采血時可能有病毒血癥。血清S/P值在3.5到5.0之間或高于5.0時,很可能為最近感染的豬。未成年豬上也觀察到相同情況。

      2】 對發生感染的免疫豬群進行評價時,可參照以下模式:

      ? 對保育豬為陰性的穩定種豬群來說,母豬和公豬的S/P值為陰性到較低的2,但不高于2.5。陰性架子豬試驗接種疫苗后S/P值高于3.5。但曾發生感染的穩定豬群即分娩率和每頭母豬每年的斷奶仔豬數均比較理想,接種疫苗后,免疫的母豬和公豬沒有觀察到這種抗體反應。

      ? 免疫繁殖豬群的平均S/P值為1.00是比較理想的。免疫后30到60天以內20%免疫豬為陰性是比較典型的。典型的免疫較好的豬群S/P值在0.7到1.8之間,有些豬可達到2.0以上。如果種豬群每年兩次接種疫苗,免疫后60天以內免疫種豬20%以上為陰性,則應對疫苗處理和接種操作進行檢查。

      ? 對每年四次或更多次接種疫苗的豬群來說,超過20%的免疫豬為血清陰性并非不常見。但缺乏可檢測體液抗體的依據尚不清楚。但這些血清陰性的免疫豬在被田間PRRSV毒株感染后,多數會轉陽。田間毒株侵入并傳播引起免疫豬群再次發生繁殖障礙或生產成績不佳,抗體水平則會發生變化。反復感染的母豬抗體水平高于3.0也不是不常見,如上所述,通常此類豬群所有的母豬和公豬ELISA檢測都為陽性。

      3】 免疫母豬所產仔豬的母源抗體逐漸下降,而種豬群中存在病毒循環,3-4周齡仔豬的S/P值在0.7到陰性之間?贵w水平高于1.8的豬可能為斷奶后轉入保育舍有病毒血癥的豬。在沒有病毒循環的保育舍,多數仔豬在6周齡時為陰性。如果保育舍有很多豬發生病毒血癥,則7周齡時S/P值會升高,多數豬呈陽性,S/P值高于1。9到10周齡時,若保育舍病毒循環非;钴S,則所有豬均為陽性。多數7到10周齡的陽性保育豬很可能排出PRRSV。

      4】 轉入育肥舍時30到80%的保育豬為陽性,隨后在育肥舍繼續發生感染,血清轉陽。這期間平均S/P值可能不升高。我們觀察到許多豬舍中陽性豬比例很高,但S/P值很少高于1.8。其原因可能與房舍的設計及豬的流動有關。
     4 血清學檢測結果的應用

      解讀PRRS血清學結果時應考慮到以下幾個問題或局限。美國豬群中PRRS流行率【80%】很高,單個樣品的血清學信息不足以診斷臨床PRRS。例如,一頭豬采一次樣測定為血清陰性,這一結果有好幾種可能性:

      1】 這頭豬未被PRRSV感染;

      2】 這頭豬最近感染PRRSV但尚未發生血清轉陽;

      3】 這頭豬感染了PRRSV但血清呈陰性;

      4】 由于檢測方法的敏感性低或操作失誤造成陰性。

      因此,PRRS血清學方法應主要用于確定豬群是否曾發生PRRSV感染。

      PRRSV特異性抗體不能維持終生。IFA和/或ELISA可測抗體的持續時間相對較短,推薦用于青年豬的檢測,以建立豬群的PRRSV感染狀況。在單點式從分娩到育肥豬場,生長育肥豬的PRRSV感染的血清學流行率往往最高。通常10份育肥豬的血清樣本足以確定豬群是否曾感染PRRSV。對多點式生產系統來說,各生產階段均為一個單獨的群體,因此每個場區都應采樣。

      檢測到成對樣品血清轉陽即可診斷繁殖障礙或呼吸疾病的原因為PRRSV感染。為了進一步確認正在發生PRRS,建議將血清學檢測和病毒分離結果【如病毒血癥】結合起來。

      采用IgM IFA,IgG IFA和SVN方法,獲得的血清學結果可將豬群中感染PRRSV的豬分為3類:未感染豬、急性感染豬和抗體水平下降的豬。未感染豬3種方法的檢測結果均為陰性。急性感染豬則是IgM和/或IgG的IFA滴度為64的,但沒有可檢測的SVN抗體。

      部分研究數據顯示PRRS特異性SVN抗體在清除血中循環病毒方面發揮作用。然而,在存在循環抗體的條件下發生長期病毒血癥和PRRSV持續感染,低濃度病毒特異性抗體存在時PRRSV感染的抗體依賴增強效應,這兩種現象對抗體的保護作用提出質疑。因此,確定中和抗體與保護性免疫的關系非常重要。

      PRRS病毒分離株的廣泛抗原變異會影響豬群的血清學信息的解讀,因為診斷實驗室所用的毒株可能會導致假陽性結果。這一潛在問題可通過使用商品化ELISA試劑盒來避免,因為IDEXX試劑盒含有多種不同PRRS病毒的抗原。實際上,該試劑盒可用于檢測北美株和歐洲株PRRS病毒分離株的抗體。

      盡管現有的PRRS血清學檢測方法存在許多限制和缺陷,但推薦將這些血清學方法對豬群進行:a】 臨床疾病過程檢測;b】 來源豬場和引入豬群的PRRS感染情況評價;c】疫苗效率評價。

      附件:多數北美獸醫診斷實驗室都使用IFA檢測,但歐洲實驗室則使用PRRS病毒感染的豬肺泡巨噬細胞進行IPMA檢測。各種檢測方法的優缺點總結于表1。

      

     表1 PRRS血清學檢測的對比,方法優點缺點

    方法

    優點

    缺點

    IFA

    特異性高 早期診斷  

    抗原變異會影響結果 結果主觀判定

    IPMA

    特異性高 敏感性高 早期診斷

    結果主觀判定 高背景 抗原變異會影響結果

    SVN

    可檢測期長

    敏感性低 耗時 抗原變異會影響結果

    ELISA

    自動化操作 高品質控制

    高背景*

      *這是ELISA方法大體上的潛在問題,但商品化PRRS ELISA試劑盒不存在該問題。

     來源:豬病新干線  作者:豬病新干線 
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