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    母豬流產與高熱綜合征主要病原檢測以及規模豬場豬繁殖與呼吸綜合征血清學監測與分析
    http://www.dzyan360.cn | 時間:2008-02-10 13:54:26 | 關注人次[] | 字體設置:

    周緒斌 焦連國 劉明明 許秀梅 趙亞榮

    大北農集團生物制品事業部 北京海淀 100085

     

    要:2006 年發生于我國豬群的母豬流產與高熱綜合征對我國養豬業造成很大經濟損失。我們對 2006 年底 11個發生母豬流產與高熱綜合征豬場常見病原進行了檢測, 結果 26 份流產胎兒或高熱病組織樣品經 RT- PCR 檢測有25 PRRSV 核酸為陽性。7 個豬場中有 個場檢測到豬瘟病毒抗原陽性, 個豬場中有 個豬場存在偽狂犬野毒抗體, 河北某場檢測到弓形體抗體呈陽性。這說明 PRRSV 感染很可能是母豬流產和高熱綜合征疫情的重要原因之一, 但是真正的病因和發病機理還有待于進一步深入的研究工作。本研究利用 ELISA 方法對 2006 年全年部分省市 52 個規模豬場共 597 份樣品進行了 PRRSV 血清學檢測, 發現 80.8%豬場豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)血清學陽性, 樣品陽性率為 38.7%。說明 PRRSV 感染在我國已經很普遍, 對于 PRRSV 的控制應采取綜合措施, 而不可僅僅依賴疫苗。

     關鍵詞: 母豬流產; 豬無名高熱綜合征; 豬繁殖與呼吸綜合征病毒; RT- PCR

    2006 月起, 一場從我國南方 江西等省開始流行的嚴重疫病給我國 養豬業造成巨大的損失。這種傳播速 度快、發病和死亡率高、豬體溫升高、治療效果差的疫病被稱為"豬無名高熱 。⒒颍⒇i無名高熱綜合征"。進入 2006 年年底, 似乎寒冷的氣溫也無法阻止該 病的流行, 繼續給我國北方地區豬群造 成威脅, 而且繁殖障礙問題尤其突出, 母豬發生流產和產死胎非常嚴重, 豬場生產造成巨大損失。關于發病的 原因還不完全清楚。在前期工作中, 研究機構發現變異的豬繁殖與呼吸綜 合征(藍耳。┎《荆ǎ校遥遥樱郑┰诖舜我 情發生中起重要作用, 中國獸藥監察所寧宜寶等從病死豬病料中分離到了 PRRSV, 病毒單獨感染實驗豬產生高熱并死亡, 但病死時間和病理變化與田

    間有差異。另外其它有關單位發現圓環病毒Ⅱ型(PCV- 2)和巴氏桿菌等細菌也是檢出率較高的病原。另有部分學者分離到了新的病毒, 但是對其生物學特性和致病機理還有待于進一步深入的研究工作。豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由PRRSV 引起的以母豬繁殖障礙和呼吸道疫病為特征的嚴重傳染病。自 1987年在北美首次報道發生以來, 該病幾乎席卷全球所有養豬的國家和地區, 給全球養豬業造成巨大經濟損失。我國在1995 年少數豬場爆發 PRRS, 隨后迅速在全國流行, 目前已是我國豬群的重要威脅性傳染病, PRRSV 一方面引起母豬流產、死胎、產木乃伊胎, 同時也是豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)的重要原發性病原, 還可造成豬體免疫抑制, 目前尚無特別有效的防控手段。我們對 2006 年底(11- 12 月)從河北、河南、浙江、江西、山西等 個省 11個規模豬場發生母豬流產和(或)無名高熱癥病豬的樣品進行了部分常見病原

    的檢測。其中, RT- PCR 方法對所有樣品進行了 PRRSV 病原檢測, 同時對2006 年國內部分地區 PRRSV 血清學

    流行情況進行了總結, 一并報告如下。

    一、材料與方法

    1. 檢測樣品

    來自河北、河南、浙江、江西、山西等 個省 11 家規;B殖場 26 份發生母豬流產和高熱綜合征的流產胎兒或組織樣品, 發病時間為 2006 年底。

    2. 血清學樣品

    來自北京、河北、天津、浙江、山東、江西、山西、河南、遼寧等地共 52 個規模豬場共 597 份樣品, 樣品采集時間為2006 1- 12 月。

    3. 發病情況

      在這些發病場中, 由于管理水平和隔離條件不同, 流行特征、臨床癥狀和病理變化存在一定差異。發生高熱病的病例大部分豬場從保育豬開始, 有些豬場發病先從生長育肥豬開始, 部分豬場則首先表現為嚴重的母豬繁殖障礙, 另有部分豬場所有豬群同時發病, 哺乳仔豬一般最后受影響。疫病傳播速度極快, 如不果斷采取措施, 最終都會發生所有豬大面積感染、發病和死亡, 發病率 10% ̄50%, 病死率很高, 一般達30% ̄50%, 有的豬場甚至高達 100%。

    臨床主要癥狀是豬群突然發病, 采食量下降或食欲廢絕, 發病豬體溫升高至40 ̄41.5℃, 高燒不退, 呼吸困難, 精神沉郁。部分病豬流鼻涕、眼瞼腫脹、眼睛有粘性分泌物, 甚至造成雙眼粘合;钾i皮膚發紅, 首先從耳部開始, 后期四肢末梢、腹部出現紫斑, 也有部分豬皮膚蒼白。部分豬毛孔出現出血性滲出,皮膚呈鐵銹樣。少數豬出現神經癥狀, 表現為步態失調, 死前角弓反張或四肢亂劃。部分豬便秘, 也有部分豬出現嚴重腹瀉。值得關注的是, 在此次北方的疫情中, 母豬的繁殖障礙表現非常明顯, 部分母豬在懷孕后期出現流產, 產死胎、弱仔和木乃伊胎, 繁殖障礙發病率超過 50%, 有的豬場在 1 ̄2 個月內達到 100%, 同時伴有母豬發熱。 病理變化可能由于病程的長短、繼發感染與混合感染的情況不同而存在差異。病豬主要表現為肺部病變, 出現間質性肺炎, 有的肺部有出血點, 有的有一層纖維素樣滲出物。肺腫脹、變硬、間質增寬, 呈斑駁狀黃褐色非萎陷性的橡皮狀肺。有的病例中尖葉、心葉及膈葉下緣出現對稱性肉樣病變。氣管內充滿大量泡沫樣分泌物, 肺門淋巴結腫大出血明顯。部分病豬胃部出血, 潰瘍, 胃內空虛,

    滿黃色積液。肝臟呈紫黑色, 部分豬脾腫大、梗死。腸系膜淋巴結腫大呈串珠狀,少見出血。部分病豬喉頭出血, 部分豬膀胱有少量出血點。腎臟以腫大為主, 被膜不易剝離, 質地變脆, 出血少見, 個別病例有密布的點狀出血。腦膜輕度充血。病程長的病豬關節腫漲, 關節腔內充滿大量漿液性或膿性積液。發熱的病豬通常很難用常規藥物控制, 即使通過安乃近或氨基比林將體溫降到正常, 但很短的時間馬上反彈, 用各種抗菌藥物治療效果不佳。

    4. 常見病原的檢測

    豬瘟病毒 (CSFV) 抗原檢測采用ELISA 方法, CSFV 抗體檢測采用阻斷

    ELISA 方法或(和)間接血凝法, 偽狂犬病毒(PRV)野毒檢測采用 gE- ELISA 方法, 乙型腦炎病毒抗體檢測采用乳膠凝集法, 細小病毒、弓形體和 PCV2 抗體檢測采用 ELISA 方法。

    5. RNA 的提取

    采用 Trizol (GIBCO BRL 公司)提取組織總 RNA, 操作按說明書進行。

    6. PRRSV RT- PCR 擴增上 5' ATGC-

    CAAATAACAACGGCAAG 3', 5' -ACAGCATCACCCTCAG CATGA- 3',擴 PRRSV ORF7。10ml 反轉錄體系包括: MgCL2 ml, 10×RT Buffer ml, ddH2O 3.75 ml, dNTP   ml, RNase Inhibitor 0.25 ml, AMV 反轉錄酶 0.5 ml, 下游引物 0.5 ml, RNA1 ml。反轉錄 程序: 0℃ 20min, 99℃5min, 5℃ 5min。50 ml PCR 反應體系為: 5×PCR Buffer 10 ml, ddH2O 29.25ml, TaKaRa Ex Taq HS 0.25 ml, 上游引物 0.5 ml, cDNA 10 ml。PCR 反應程序為: 4℃ 3min, 4℃ 30s, 5℃ 40s,72℃ 40s, 30 個循環, 2℃ 10min, 1%的瓊脂糖凝膠檢測 PCR 產物。

    7. PRRSV 抗體檢測

    采用間接 ELISA(武漢科前動物生物制品有限責任公司)方法, 操作參照說

    明書進行。

    二、結果與分析

    1. 常見病原實驗室檢測結果

    11 個發生母豬流產與高熱綜合征豬場常見病原的檢測結果見表 1。利用RT PCR 了PRRSV 核酸的檢測, 結果 26 份流產胎兒或高熱病組織樣品中有 25 份為陽性。從 個豬場中, 個場檢測到豬瘟病毒抗原呈陽性, 個豬場中有 個豬場流產母豬存在偽狂犬野毒抗體, 河北 B場檢測弓形體抗體呈陽性, 見表 1。

    2. PRRSV RT- PCR 擴增結果

    26 份發生“豬無名高熱綜合征”病料經 RT- PCR 檢測, 擴增產物分子量大小與預期結果相符, 380 bp, 結果如圖 1~4 所示。圖 顯示, 河北

    份、河北 份病料均為 PRRSV 性; 顯示, 河北 份、浙江 D場 、 PRRSV 陽性; 顯示, 河北 份均為 PRRSV 陽性; 顯示, 江西 G場 份、河北 份、河北 份、山西 份、河北 份病料中只有河北 場有 份病料為陰性, 其余均為 PRRSV 陽性。

     

    3. 部分規;i場 PRRSV 血清學監測結果經 ELISA 方法檢測 52 個規模豬場共 597 份樣品, 80.8%豬場 PRRSV血清學陽性, 樣品陽性率為 38.7%, 見表 2。值得關注的是, 除極個別豬場外,大部分豬場都未免疫 PRRSV 疫苗。

     

    三、討論

     1. 自從 2006 月我國南方江西 部分地區首先發生豬的無名高熱病以來, 該病迅速向我國其他地區蔓延, 豬群發病率和死亡率很高。同時, 在北方發生的疫情中, 母豬流產問題尤其嚴重。關于致病的真正原因也眾說紛紜,獸醫診斷中心發現由于 PRRSV nsp2基因的突變導致組織嗜性發生改變, 同時病毒毒力增強, 從而引發嚴重疫情其他學者分析 PRRSV ORF5 基因的突變也可能導致免疫原性發生改變使致病力增強。中國獸藥監察所寧宜寶等從病死豬病料中分離到了 PRRSV, 病毒單獨感染實驗豬產生高熱并死亡, 但病死時間和病理變化與田間有差異, 因此提示與豬場的一些激發因子或其他病原混合感染相關。經過對 RT- PCR陽性樣品同時應用特異性引物進行分析, 證實部分病毒存在較明顯的變異。我們在檢測中也發現, 部分豬場同時存在豬瘟病毒或(和)偽狂犬野毒感染, 特別是在母豬偽狂犬野毒感染率高的豬場, 母豬流產問題更加嚴重。北方部分豬場同時存在弓形體感染。另有部分學者從病料中分離出的新的病毒, 但是這種新病毒在致病中的作用如何有待深入的研究, 是否該新病毒 PRRSV ? 于PRRSV PCV- 等共感染降低了其它病原的感染致病閾值, 從而使豬群更易發? PCV- 共感染可能進一步加重了疫情, 因為二者都可引起免疫抑制。嚴重的免疫抑制狀態一方面可能促進了強毒 PRRSV 的變異, 另一方面在我國豬群衛生狀況普遍不佳的情況下,病原細菌的繼發與混合感染促使疫情突發, 損失加重。因為我們在監測工作中發現, 在發病的保育豬或生長豬中,豬瘟和其它病原抗體滴度都非常低。另外是否在同一個豬場或同一動物體內存在多個 PRRSV 毒株感染?我們從最近發生高熱病同時引起嚴重繁殖障礙的 11 個豬場的 26 份病料中, 25 份檢測到了 PRRSV, 雖然目前尚不能完全肯定 PRRSV 是否就是此次高熱病中的唯一致病因素, 但如此高的檢出率說明 PRRSV 感染確實在發病中起了非常重要的作用, 而血清學監測結果顯示, 2006 年全國部分地區 PRRSV 血清學監測陽性率為 38.7%。

     2. 血清學分析表明, PRRS 在我國豬群中普遍存在, 在我們 2006 年監測的 52 個規;i場中, 80.8%豬場血清學為陽性, 38.7%送檢血樣呈陽性,

    這些豬場絕大部分都未注射 PRRSV疫苗。這與國內其它單位的報道基本一致, 衛秀余等 2005 年用 PCR 方法對57 個保育豬發生呼吸道疾病的豬場送檢的 254 份樣品進行了 PRRSV 抗原檢測, 53 個豬場檢出陽性樣品, 占93%, 樣品陽性率為 91.3%, 分別比2004 年上升 3%和 6%。另外對 60 個豬場送檢的 226 份死胎樣品檢測, 13 個豬場檢出陽性, 21.7%, 樣品檢出率占 20.4%。宋云義等在河南省 個年產萬頭商品豬場中隨機采集 165 頭種豬及仔豬血清進行藍耳病血清學調查, 結果 為98.18%, 仔豬群為 78.65%, 而新建商品豬場種豬群陽性率為 63.64%, 仔豬群為 9.52%。

     3. 由于高熱病的病原和發病機理還在進一步研究之中, 目前尚無特效的防制方法, 也沒有高效特異的疫苗。防制高熱綜合征, 嚴格的生物安全措施是非常關鍵的環節, 如果發現疫情, 將樣品送相關單位進行檢測的同時堅決果斷處理病原, 封鎖豬舍和豬場,采取嚴格的消毒和隔離措施, 對發病豬進行掩埋和無害化處理, 筆者在部分豬場緊急疫情處理中證明這是最有效的措施, 同時對可疑豬群和發病豬群應用胺基維他飲水, 緩解應激, 添加適當的廣譜抗菌素, 而不要急于注射大劑量退燒藥。加強對豬群的免疫, 特別是豬瘟、偽狂犬病、喘氣病、細小病毒病等, 這些疫病都有非常有效的疫苗。

    4. 關于豬繁殖與呼吸綜合征的控制措施中, 弱毒疫苗是有效的措施之一。但是首先要考慮的問題是目前可用的疫苗毒株能否對變異的 PRRSV 有免疫保護作用?同時 PRRSV 獨特生物學特性決定在應用弱毒疫苗時考慮如下因素: 首先疫苗病毒毒株能在豬體內

    存在較長時間, 長達數周到數月, 疫苗毒能從免疫豬傳播給非免疫豬, 疫苗毒株可通過胎盤引起先天性感染, 疫苗毒能持續存在于公豬體內并通過精液傳播, 疫苗誘導的保護性免疫反應形成慢, 因此, 在發病階段緊急免疫的效果如何有待于探討? 疫苗形成保護性免疫的時間可能與毒株有關, 免疫接種后有些免疫的豬、后備母豬和經產母豬不能產生血清學陽轉, 成年母豬成功的免疫接種(依血清學轉化判斷)可能不保證完全沒有經胎盤感染和強毒垂直傳播。以上特性決定目前的 PRRSV 疫苗不可能像豬瘟兔化弱毒疫苗、偽狂犬基因缺失疫苗等效果那么確實。藍耳病弱毒疫苗 1994 年起就在北美得到應用, 然而,PRRS  仍然是當前美國豬群的頭號傳染病, 據最新的報道, PRRS 給美國豬業造成的經濟損失為 5.6 億美元, 北美的實踐表明, 常規的疫苗和豬群流向控制措施并不能有效控制 PRRS 的流行。這也給我國養豬業很大的啟示, 我們不可能依靠現有的疫苗解決所有的問題,而且免疫方案和免疫程序也應因場而異, 因地制宜, 應根據監測結果制定本場的免疫方案。對于藍耳病的控制需要采取綜合措施。豬場的生產管理, 豬只定向流動, 培育后備母豬, 適時保育豬清群, 科學的營養, 合適的用藥計劃, 嚴格的免疫程序, 定期的免疫監測才是控制 PRRS 和高熱病的良方。同時國家有關部門也應進一步加強動物疫情的預警應急機制, 開展對高熱病病原和致病機理的研究, 迅速組織

    包括相關農業院校、研究所、生產單位、豬業協會、學會以及部分企業的技術服務專家開展聯合攻關, 同時加強對獸藥、疫苗混亂市場的監督與管理, 以保證我國豬業健康持續發展。

     來源:養豬  作者:周緒斌 倪 嬌 焦連國 劉明明 許秀梅 包 爽 趙亞榮 
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